大神教你如何选择培养基

初次接触细胞培养时经常会疑惑这种细胞该用哪一种培养基呢?其实这个问题的答案可以很简单，也可以很复杂。 如果这种细胞是购自ATCC或其他的细胞库，那很简单，看说明书或上细胞库官网查询即可，另外也可以参考相关文献。但如果建立一种全新细胞系，根本找不到任何参考，那就得花点时间自己试验了，可以同时购买几种培养基，然后做一个细胞生长曲线实验，确定哪种培养基最合适。 当然，有时候会发现你的最佳培养条件与文献报道的不同，即使培养条件相同，细胞状态也不尽相同，这很正常。因为试剂、水、不同批号的血清之间都存在着差异。要提高培养液的稳定性，可以从培养基和血清两方面入手。 常见的细胞培养基可以分为天然培养基、合成培养基和无血清培养基等。 ★天然培养基 是指来自动物体液或利用组织分离提取的一类培养基，如血浆、血清、淋巴液、鸡胚浸出液等，由于天然培养基制作过程复杂、批间差异大，逐渐被合成培养基所替代。 ★合成培养基 是用化学成分明确的试剂配制的培养基，组分稳定，主要包括糖类、必需氨基酸、维生素、无机盐类等。合成培养基发展至今已有几十种，最常用基础细胞培养基6～7 种，如MEM、DMEM、Ham’s F12、F10、PRMI1640、199 等。近年来还出现了营养成分更加丰富的低血清细胞培养基。 ★无血清培养基 是指在使用中无需添加血清的细胞培养基，且其组成成分不含有任何动物组分。按照其组分分类，还可以分为无动物组分无血清细胞培养基和化学限定无血清细胞培养基，前者组分中可能含有某些植物来源成分，而后者完全由化学成分明确的组分组成。 配制培养基时，以前大部分实验室都是用干粉培养基，需加水溶解、调pH值、高压、过滤，过程中容易产生浓度误差，而且有些实验室的水质并不理想，所以培养的效果会有差异。商品化液体培养基，因其大批量工业化生产，批间差、人为误差等大大减少，使用其培养细胞会相对稳定。 天然培养基的一些营养成分不能被合成细胞培养基完全代替，因此一般需在合成细胞培养基中添加一定浓度的牛血清、马血清或人血清等。添加血清的主要作用是提供各种氨基酸、维生素、无机物、脂类物质、核酸衍生物等细胞生长必须的物质，另外还含有激素、各种生长因子、接触和伸展因子等。使用血清过程中，不同批次间差异不可避免，不同制备方法、除菌方法、不同区域动物种类、年龄及储存条件等都可能影响血清质量。因此选择一批血清就要尽可能长期使用，在需要更换时，一般需要进行血清测试，主要参考以下4个参数。 01 接种率 接种率是一个很有说服力的参数。克隆培养时，细胞呈低密度状态，因此最敏感。以101-102/ml接种细胞，10-20天后染色观察及计数集落。观察接种率（存活率）的差别，集落大小（细胞增殖速度）的差别。每种血清应测试2%-20%范围内的不同浓度，这样可以了解一种血清在低浓度时是否具有同等效果，同时还可以了解在高浓度情况下是否具有细胞毒性。 02 生长曲线 可以根据细胞在每批血清中的培养状况绘制出一条生长曲线，从中可以确定对数生长期，倍增时间及饱和密度。对数期生长说明培养物已适应力这种血清；倍增时间短有利于很快的获得大量细胞；而饱和密度高说明在血清用量同等的情况下可以获得更多的细胞。 03 细胞培养特征的保留 必须保留原有的细胞培养特性，如更换血清后某种病毒的宿主细胞对病毒感染性是否改变，又或者是否保留对某种药物的敏感性。 04 无菌程度 必须没有微生物污染，必要时应进行支原体检测。 总之，在进行细胞培养前需要充分查阅相关资料，根据不同细胞培养特性选择合适的培养基及血清，并进行筛选以优化最佳培养条件。 “细胞研究”是一个公益性的、科普性的微信公众平台，旨在向大家分享与传播细胞培养、细胞功能及技术等研究中的正确观念。