技术交流｜请教大家一个包慢病毒的问题

本人之前没有做过慢病毒实验，最近要在jurkat细胞中过表达一个基因（蛋白），实验室没有电转系统，只能包慢病毒。我是自己上网查protocol，然后试着做的。

目前包了3次，第一次包的病毒感染jurkat后WB检测有目的蛋白。用完之后第二次包出来检测不到目的蛋白。第三次包的要加较多的病毒才有表达（10c mdish包的，不浓缩，2.1ml感染7.5e5个细胞）。

为了增加感染效率，我都会加polybrene,并且每次是加了病毒后平角离心机离心1h，第一次感染12小时后二次感染.

想问问大家如何能够比较稳定的包出滴度比较高的病毒？我上网查看到跟293T状态有很大关系，但是我包的时候293T状态都是可以的。不知道还有哪些要注意的地方呢？

这是我的操作步骤

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